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源葉生物 / 2015-05-08
目的
1．學(xué)習(xí)微生物涂片和染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌簡(jiǎn)單染色法；
2．學(xué)習(xí)無(wú)菌操作，并鞏固顯微鏡的使用方法；
3．學(xué)習(xí)在油鏡下觀察細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)。
原理
    由于細(xì)菌體積小、菌體透明，活體細(xì)胞內(nèi)含有大量水分，且對(duì)光線的吸收和反射與周圍背景沒(méi)有顯著的明暗差，因而很難在普通光學(xué)顯微鏡下觀察它們的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。只有經(jīng)過(guò)染色，借助顏色的反襯作用才可看清菌體形態(tài)以及菌體表面結(jié)構(gòu)。染色技術(shù)是觀察微生物形態(tài)結(jié)構(gòu)的重要手段。

   能夠使微生物著色的化合物被稱為染色劑，染色劑一般都是成鹽化合物。目前普遍采用的微生物染色劑多為苯的衍生物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)中除含有苯環(huán)外，還連接有發(fā)色團(tuán)和助色團(tuán)。發(fā)色團(tuán)可使化合物顯色，而助色團(tuán)則能增加色度，并因具有電離特性，可與菌體細(xì)胞相結(jié)合，從而使其著色。

   含有酸性助色團(tuán)（如羥基-OH）的染色劑稱為酸性染色劑，其電離后分子帶負(fù)電，可與鈉、鉀、鈣、氨等離子結(jié)合，多用于細(xì)胞質(zhì)的染色，如酸性品紅、剛果紅等。含有堿性助色團(tuán)（如氨基-NH2）的染色劑稱為堿性染色劑，其電離后分子帶正電，主要用于細(xì)胞核和異染粒等酸性細(xì)胞結(jié)構(gòu)的染色。由于細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中布滿核物質(zhì)和異染粒等結(jié)構(gòu)，因此細(xì)菌染色一般采用堿性染色劑，通常包括氯化物、硫酸鹽、醋酸鹽或草酸鹽等。
   細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色，即只利用一種染色劑使菌體著色。此法操作簡(jiǎn)單，適用于細(xì)菌形態(tài)的觀察。通常細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色也采用堿性染色劑，如結(jié)晶紫或堿性品紅等，堿性染料不是堿而是一種鹽，電離時(shí)染料離子通常帶正電荷。而在中性、堿性或弱酸性的溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶有負(fù)電荷，這樣帶正電荷的染料離子就容易與帶負(fù)電荷的菌體細(xì)胞相結(jié)合并使其著色。染色后便于觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小和排列方式等特征。